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欧美人曽交流母种制作-孢子分离法
作者:    来源:    点击数:   更新时间:2011年01月10日 【字体:

  在自然界里,欧美人曽交流并不是单独存在的,而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离,就是把这些和欧美人曽交流一起生活的杂菌分离出来,通过培养,获得纯的优良菌种。菌种分母种原种栽培种(制种程序可参考相关图片)。

孢子分离法

  孢子分离法,是用欧美人曽交流的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝,培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强,但孢子个体之间有差异,且自然分化现象较严重,变异大,需经出菇试验才能在生产上应用。

  1、单孢分离法

  是每次或每支试管只取一个担孢子,让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝,有结实能力,可采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上较少采用,而且欧美巨乳复杂,一般采用多孢分离法。

连续稀释法获取单孢子

图1:连续稀释法获取单孢子

  2、多孢分离法

  就是把许多孢子接种在同一培养基上,让它们萌发、自由交配来获得欧美人曽交流纯菌种的一种方法。具体操作方法,有以下几种:

  ①、种菇孢子弹射法

  选择个体健壮、朵形圆正,无病虫害、出菇均匀、高产稳产,适应性强的八九分成熟的种菇,切去大部分,菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内,把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面,漏斗倒盖在培养皿上面;上端小孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上,静置12-20小时,菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印(平菇极淡紫色,蘑菇、草菇为褐色,欧美巨乳、金针菇孢子印白色)。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发,生成菌落时,选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。

  还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后,按上述程序,轻轻掀开玻璃钟罩,将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上,放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩,用纱布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。移入20℃左右恒温箱培养。

孢子收集器

图2:孢子收集器

孢子印法

图3:孢子印法-1

孢子印法2

图4:孢子印法-2

  ②、褶上涂抹法

  按无菌操作分离时;应选择成熟的种菇,用接种针直接插入褶片之间,轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子,再在培养基上划线接种。

  ③、钩悬法

  取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片(黑木耳毛木耳、白木耳〕,用无菌不锈钢丝(或铁丝、棉线等其他悬挂材料)悬挂于三角瓶内的培养基的上方,勿使接触到培养基或四周瓶壁。置适宜温度下培养、转接即可。

钩悬法采集孢子

图5:钩悬法采集孢子

  ④、贴附法

  按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块,用溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊等贴附在配管斜面培养基正上方的试管壁上。经6-12小时的培养,待孢子落在斜面上,立即把孢子连同部分琼脂培养基移植到新的试管中培养即可。

菌褶贴附弹射法

图6:菌褶贴附弹射法

  注意事项

  孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复壮,当母种定植一星期左右,菌丝布满斜面时,选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、无感染杂茵的母种试管,进而转管扩大,一般到栽培种,转管不宜超过5次。

  孢子分离得到的母种,必须通过出菇试验,鉴定为优质菌种后,才可供生产使用。对于一些异宗结实的品种应取其子实体经组织分离后再用于生产。

  一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、欧美巨乳、冬菇和草菇等,都可用多孢分离法获得母种。

  现就银耳孢子分离略述于下

  按无菌操作获取种耳后,悬挂种耳的三角瓶经12小时培养后,瓶底培养基表面就有“孢子印”。取出种耳,置20℃—25℃温箱培养2-3天,培养基表面会出现乳白色透明的糊状小菌落,就是银耳的酵母状分生孢子形成的少量银耳菌丝。此时移接入试管斜面培养基上,待长满斜面后,再移接入营养丰富,且表面比较干燥的培养基上。经30天左右,菌落长出白色菌丝。

  银耳的酵母状分生孢子、菌丝只有与羽毛状菌丝的子囊菌(香灰菌丝)混合培养时,由后者帮助分解木材及其他一些纤维物质,提供营养,才能利于银耳孢子萌发,菌丝的定植和子实体的形成。
在两种菌丝交会时,先选出两种纯菌丝。

  羽毛状菌丝要纯化选育,一般要选取生长迅速,爬壁力强的试管斜面或种瓶,取先端菌丝,转管移接,置25℃—28℃上培养,重复转管几次即可得到优良纯种。

  银耳菌丝的特点,菌丝生长缓慢,担孢子也不易萌发。在进行两菌混合时,先取经8-1O天培养的银耳菌丝斜面,按无菌操作方法在该斜面上距银耳菌丝约0.5厘米处接入一小块羽毛状菌丝。置25℃下培养1周即得到混合好的银耳母种。

 
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